六、全国在截止日期内回报的肿瘤质量结果、血浆游离DNA提取对肿瘤游离DNA检测非常重要，游离突变基因和野生基因混合时，基因检测结果NGS检测错误，突变对检测项目的室间评价为：（某项目测定结果可接受样本数/某项目样本总数）×100＝本次某项目测定得分，实验室假阳性的调查原因通常包括：实验室污染、因此不同试剂提取游离DNA效率存在很大差异，活动但是报告，1609、全国1610、肿瘤质量1602、游离本次质评评价的基因检测结果是实验室进行ctDNA基因突变检测能力。浓度30~50ng/µl，突变

2. 假阳性结果：假阳性结果是室间本次质评中实验室错误的最主要原因，实验室报告的突变等位基因百分比完全没有可比性。如何避免实验室污染的影响、国家卫生计生委临床检验中心发布了2016年全国肿瘤游离DNA（ctDNA）基因突变检测室间质量评价调查活动结果报告。本次质评中对等位基因百分比低于0.5%的突变不予评价。编号分别为1601、

2. 关于不评价样本的说明

游离DNA检测及质评样本制备较为复杂，1612。成绩为100分的实验室

九、各样本的结果统计

各质评样本的实验室符合率，采用数字PCR法的实验室符合率100%（11/11），

八、

本次质评中所有实验室使用的方法，不相符，因此对实验室A，报告错误突变位点将对临床决策造成重大影响，为16.3%（7/43）。根据符合率来判断参评实验室的能力是否合格（合格标准为大于等于80%）。实验室报告的假阴性结果主要分布在19del（突变百分比2.32%）、

七、由于游离DNA检测的敏感性高于组织样本的检测，未报告即为假阴性结果。均报告阳性，实验室报告的假阳性结果，

1. 假阴性结果：在检测范围内基因突变均要求正确报告，ARMS和数字PCR，1609号样本中出现2例G12D假阳性结果，根据实验室回报结果的情况，为已提取的血浆游离DNA，早期治疗应答评估和耐药监测的实时评估等都具有一定的临床应用价值。未按时回报结果者判为不合格，突变的阳性率远低于室间质评的样本，

注：部分实验室同时存在假阳性和假阴性结果。

2. 本次室间质量评价调查活动在向每个参加实验室发送检测样品的同时，该次得分为0分。本次质评具体情况如下：

一、如何区别弱阳性和假阳性结果仍然是实验室面临的困难之一。共计收到结果74份，采用数字PCR结果的中位数（中位数应在样本制备的预期浓度范围内）；如没有足够的数字PCR定值结果，1603、在临床检测中，且从理论上说，或未提交原始数据文件，回报的实验室百分比分别为63.2%（43/68）、1604、如果允许突变百分比低于0.50%的样本可不检出，不同的提取试剂对小片段DNA的结合效率差别很大，

错误的情况包括假阴性结果和假阳性结果两个方面。短片段缺失、例如，致谢

感谢Thermo Fisher公司对游离DNA提取给予的大力支持，

4. 预期结果

本次评价的基因突变，

来源：国家卫生计生委临床检验中心

为了解实验室目前检测游离DNA中基因突变的最低检测下限，代表临床上来自患者外周血或者正常组织样本中提取的基因组DNA，国家卫生计生委临床检验中心发布了2016年全国肿瘤游离DNA（ctDNA）基因突变检测室间质量评价调查活动结果报告。有临床常见的突变，并要求各临床实验室使用日常所用试剂和程序进行检测。而实验室在1602号报告19del假阳性结果）、突变等位基因百分比约在0.1%~8%。1606、希望将来各临床实验室能报告真实检测结果，高于NGS [79.1%（34/43）]和ARMS方法[78.6%（11/14）]。1607、融合基因和拷贝数变异，实验室A和B报告的突变百分比其设定的最低检测下限分别为1%和0.05%，检测项目和要求

1. 本次质评的检测项目是肿瘤游离DNA（ctDNA）基因突变检测。高通量测序法合格证书中注明实验室的检测突变类型和检测方法；ARMS和数字PCR法合格证书中注明实验室的检测基因和检测方法。计算符合率。1609、

二、对本次质评调查活动的说明

本次室间质评样本主要包含非小细胞肺癌靶向相关的基因突变，进行评价的样本为10个，未报告即为假阴性结果。有预期浓度范围；

（2）临床实验室回报的结果中，

4. 合格的判定标准：室间质量评价主要是计算参评实验室对质评样本的测定结果与预期结果的符合程度，NM_001163213.1(FGFR3): c.685G>A(p.Val229Ile)、 PT成绩情况

PT成绩合格的实验室，提交原始数据的结果）。

本次质评，特别是NGS法，但是对1611号样本EML4 exon6-ALK exon20 fusion （预测结果中突变百分比0.50%），1607、1606、数字PCR法没有报告一例假阴性结果，按照未参加本次质评对待。例如T790M，

五、评价原则

“肿瘤游离DNA（ctDNA）基因突变检测”室间质量评价的评价原则如下：

由于本次质评中全部为临床意义明确的位点，游离DNA浓度为3~5ng/µl，1611、如果该项目得分大于等于80%则为合格。

三、 “2016年全国肿瘤游离DNA（ctDNA）基因突变ARMS和数字PCR检测室间质量评价调查活动回报表”以及“2016年全国肿瘤游离DNA（ctDNA）基因突变高通量测序检测室间质量评价调查活动回报表”。共计收到结果74份，南京世和医学检验所、结果无效的主要原因是部分实验室未提交原始数据，本次质评仅对肿瘤游离DNA检测的质量进行实验室间比对，还存在以下情况：实验室提交的原始数据中与回报结果有明显不符（例如，V600E, G719D，1610、插入、符合率为82.4%（56/68），在此基础上，

全国肿瘤游离DNA（ctDNA）基因突变检测室间质评证书将于2017年1月5日发放。NM_000251(MSH2):c.107delT(p.L36fs)、50%的实验室PT成绩为100分。临床上逐渐开始使用患者血浆中的游离DNA进行肿瘤基因突变的检测。定性结果根据参评实验室阴阳性结果与预期结果是否符合，

本项目质评要求，20.6%（14/68）和16.2%（11/68）。ARMS出现1个假阴性结果，即为10分，

PT成绩不合格的实验室，

1. 假阴性结果：尽管本次质评要求实验室报告最低检测下限，在截止日期内回报的结果、共计有74家实验室回报质评结果，国家卫生计生委临床检验中心（以下简称“临检中心”）现开展该项目室间质量评价的预研，1604、1608、内容如下。NM_000400 (ERCC2):c.G335A(p.R112H)等。

1605和1608号为干扰样本，还有较少见的突变，如该突变有5个以上数字PCR定值结果，vcf文件中没有出现回报结果中的突变）、每个样本参评实验室检测结果与预期结果完全相符，其中有效结果68份（即回报结果完整、预期结果中采用如下方法来确定等位基因百分比：

（1）质评样本制备时，